Cinco factores que afectan la fluorescencia de fondo alta en las tiras reactivas inmunocromatográficas

1. Grande microesferas con pequeño tamaño de NC membranas
2. Incorrecto controlar de azúcar contenido
3. Incorrecto controlar de polímero contenido
4. Incorrecto controlar de sal concentración en el sistema
5. Influencia de búfer sal tipos

1. Grande Microesferas con Pequeño Poro Tamaño de NC Membranas

Esta razón es fácil de entender. Las microesferas de gran diámetro reducen la velocidad cromatográfica a través de membranas de poros pequeños. Dentro del tiempo especificado, las microesferas no pueden cromatografíarse completamente desde la membrana hasta la almohadilla de absorción, dejando valores de fondo de fluorescencia en la membrana.

2. Cómo a Comprender el Causa de Azúcar ¿Contenido?

A muchos investigadores les gusta agregar sal tampón de baja concentración + proteína protectora + azúcar + tensioactivo + polímero a la solución de procesamiento de la almohadilla conjugada. Aunque la composición es la misma, los resultados difieren debido a las distintas cantidades utilizadas. Se sabe que agregar azúcar a la solución de procesamiento de la almohadilla conjugada puede proteger las proteínas de condiciones extremas y tiene buena hidrofilicidad sin participar en reacciones. Sin embargo, una alta concentración de azúcar aumenta la viscosidad de la solución. Si se agregan altas concentraciones de azúcar a la almohadilla de conjugado, la viscosidad de la dilución de la muestra agregada aumenta, lo que ralentiza la liberación de otras sustancias en la dilución, lo que resulta en un fondo alto a medida que grandes polímeros o microesferas permanecen en la membrana.

3. Polímero Contenido

Las altas concentraciones de polímeros en la almohadilla conjugada pueden ser problemáticas. Algunos usan PVP-10, algunos PVP K30, algunos PEG y algunos PVA. Independientemente de cuál se utilice, es fundamental determinar si son necesarios y el peso molecular y la concentración adecuados. Por ejemplo, PVP K30, con un gran peso molecular, tiene efectos adhesivos, estabilizadores y espesantes, pero altas concentraciones pueden aumentar la viscosidad de la solución, afectando el efecto cromatográfico en la membrana y dando como resultado valores de fondo altos.

4. Sal Concentración en el Búfer Sistema

Esto se refiere a todo el sistema, no solo a una única dilución de muestra o solución de procesamiento de almohadilla de muestra. El sistema completo incluye la almohadilla de muestra, la dilución de muestra, la almohadilla de conjugado y la solución de reconstitución de microesferas. La concentración de iones de sal afecta los efectos cromatográficos y se ha verificado en proyectos anteriores. Este factor puede servir como dirección para optimizar los efectos cromatográficos.

5. Influencia de Búfer Sal Tipos

Es un hecho conocido que diferentes sales tampón tienen diferentes efectos, pero algunas pueden ser más adecuadas para ciertos proyectos que otras, algunas pueden dar como resultado valores de fondo altos o bajos. Esto se relaciona con las propiedades químicas de las propias sales tampón. (Para obtener más información sobre varias sales tampón, siga las redes sociales de BIOEAST).

Resumen

1. Para mejorar fondo valores en inmunocromatográfico prueba tiras, reducir azúcar contenido (recomendado 3-5%).
2. Reducir polímero contenido (recomendado 0,1-1%) basado en específico condiciones.
3. Mejorar el sistemas sal ion concentración (alrededor de 100 mmol) como necesario para diferente proyectos.
4. Cambio del tipo de sales en la formulación tampón  puede proporcionar alguna mejora.